中净环球净化可提供动物房,动物实验室,动物洁净室,动物无菌室的咨询、规划、设计、施工、安装改造等配套服务。 构建动物细胞培养室和植物细胞培养实验室(三)
11.培养用器皿:
(1)培养器皿:供细胞接种、生长等川的器皿,可由透明度好、*的小性硬质玻璃或*而透明光滑的特制塑料制成。
(a)玻璃培养器皿的优点是多数细胞均可生长,易于清洗、消毒,可反复使用,并且透明而便于观察;缺点是易碎,清洗时费人力。
(b)塑料制培养器皿的优点是一次性使用,厂家己消毒灭菌密封包装,打开即可用于细胞培养操作。
常用的培养器皿:
培养瓶:巾玻璃或塑料制成。主要用于培养、繁殖细胞。进行培养时培养瓶瓶口加盖螺旋瓶盖或胶塞,胶塞多用于密封培养。国产培养瓶的规格以容 U(ml)表示,如 250ml、100ml、 25ml等;进口培养瓶则多以底而积(cm2)表示。
培养皿:由玻璃或塑料制成,供盛取、分离、处理组织或做细胞毒性、集落形成、单细胞分离、同位素掺入、细胞繁殖等实验使用。常川的培养皿规格有 10cm、9cm、6cm、3.5cm 等。
多孔培养板:为塑料制品。可供细胞克隆及细胞毒性等各种检测实验使用。其优点是节约样本及试剂,可同时测试大呈样本,易于进行无飽操作。培养板分为各种规格,常用的规格有:96孔、24孔、12孔、6孔、4孔等。
各种单层牛.长的细胞在培养器皿中长满时可获得的细胞数,主要是取决于器皿的底表妞积和细胞体积的大小。常用培养器皿及可获得的细胞数(以 Hela 细胞为例)。
(2)培养操作有关的器皿:
a.贮液瓶:主要用于存放或配制各种培养川液体如培养液、血清及试剂等。贮液瓶分力各种不同规格,如 1000ml、500ml、250ml、100ml、50ml、 5ml 等。
b.吸管:主要分为刻度吸管、无刻度吸管。刻度吸管主要用于吸取、转移液体,常用的有1ml、2m1、5ml、10ml 等规格。无刻度吸管分为直头吸管及弯头吸管,除可以作吸取、转移液体外,弯头尖吸管还常用于吹打、混匀及传代细胞。
c.加样器(移液器):用于吸收、移动液体或滴加样本。可根据需要调节量的大小,吸量准确、方便。尤以微量加样器,可保证实验样品(或试剂)含量,重复性良好。n前,可高温消毒的,多通道的各类移液器可供使用者选择,能确保加样准确、快速、方便并且达到无菌要求。
(3)其他用品:尚有收集细胞用的离心管,放置试剂或临时插置吸管用的,装放吸管以便消毒的玻璃或不锈钢容器,用于存放小件培养物品便于高压消毒的铝制饭盒或贮槽,套于吸管**部的橡胶吸头,封W各种瓶、管的胶塞、盖子、冻存细胞用的安瓿或冻存管、不同规格的器、烧杯和:U:筒以及漏斗,**净工作合使用的酒精灯,供实验人员操作前清洁消毒手使用的盛有酒精或其他消毒液的微型喷壶等。
m.器械:主要用于解剖、取材、剪切组织及操作时持取物件。
(1)常用的有:手术刀或解剖刀、手术剪或解剖剪(弯剪及直剪),川于解剖动物、分离及切剪组织,制备原代培养的材料;虹膜小剪(弯剪或直剪),用于将组织材料剪成小块;血管钳及组织镊、镊(弯、直),用于持取无菌物品(如小盖玻片)夹持组织等;口腔科探针或代川品,川以放置原代培养之组织小块。
(2)设备:细胞培养实验室除了应配备上述的常川基本设备以外,如有条件,可添
置一些或的设备仪器,以使行效、、深入地进行实验室工作。
例如:
1.酶联*检测仪,可用于进行*学测定及细胞毒性、药物敏感性检测等。
2.温冰箱(-85℃) 便于储存某些试剂及标本。
3.旋转培养器 用丁某些细胞或需要收获大量细胞的培养。
4.荧光显微镜 进行荧光染色样来的观察。
5.流式细胞仪 可及快速检测细胞。
6.用丁检测细胞培养条件的各种仪器,例如为快速分析细胞培养基中主要或关键营养成分、代谢产物及气体含M设计的多功能细胞培养分析仪、手提式浓度测定仪等。
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浅析实验动物房的工程设计(-)
一、实验动物房设计概述
法规相关规定
实验动物房应该严格按照国家相关规范来设计。目前实验动物房的建造设计需要遵循的国家规范主要有:GB 14925—2010《实验动物环境及设施》和GB 50447—2008《实验动物设施建筑技术规范》。
这些规范对目前国内生物制药企业使用的实验动 物房的硬件设施,如建筑、空调、水、电等均有详细的要求。
1.2 动物饲养环境设施分类
目前,生物制药企业的动物饲养环境设施可分为三类,主要使用前两类环境设施饲养动物。
2.1 普通环境设施
该环境设施符合动物居住的基本要求,但不能 完全控制因子,适用于饲育教学等用途的普通级实验动物。目前企业通常在普通空调环境下饲养 家兔,饲养的环境要求:温度18~29 ℃,相对湿度 40%~70%,换气次数8次/h,无特定压差。
2.2 屏障环境设施
该环境设施适用于饲育清洁实验动物及无特 定病原体的实验动物,该环境严格控制人员、物品和环境空气的进出。目前企业通常在该环境下饲养 小鼠和,饲养的环境要求:洁净度7级,温度 20~26 ℃,相对湿度40%~70%,换气次数15次/h,压差10 Pa[2] 。
2.3 隔离环境设施
该环境设施采用无菌隔离装置以保存无菌或无外来污染的动物,环境要求较高。
目前生物疫苗生产企业较少采用该环境设施。
二、实验动物房的布局
由于实验动物*受到环境干扰,且在饲养过 程中会产生异味,影响其他生产或生活用房,因此, 实验动物房总体布局的选址和建造基本要点有:
(1)立建造动物房;
(2)避开车流和密集处,避开厂区震动和 噪声大的区域;
(3)选择在全年主导风向下风处,且对厂区其 他生产或生活设施影响小的区域。
2.2 工艺平面布局
实验动物房的工艺平面布局设计应该在符合 法规要求的前提下,达到布局合理、、经济、安 全等目的。
2.1 工艺设计流向
实验动物房的工艺设计流向包括:实验人员、 饲养人员和检疫人员的进入和退出路线;动物的 进 入和退出路线,解剖和废弃尸体的流向;动物用垫料和饲料的进出流向;笼器具进出流向;样品进出流向等。
各种流向需要合理分流,避免交叉 污染。
2.2 功能间设置
实验动物房从功能间设置上主要包括人员的 衣间、动物饲养间、实验间、动物检验间、洁净物 品存储间、清洗间、解剖间、饲料和垫料的存储间等,各功能间设置需齐全、合理。
2.3 走廊模式
目前常见的实验动物房走廊模式有:
普通的家兔实验动物房以及小规模的SPF小鼠实验动物 房设置为单走廊模式,而大规模的SPF小鼠和 实验动物房则多采用双走廊或多走廊模式。
2.4 工程成本
实验动物房的建设和运行成本都很高,因此在建造设计之初就考虑周全。
(1)从功能面积上考虑,在够用的前提下遵循紧凑、合理的原则。
(2)由于动物房基本采用全新风系统,因此净化空调的房间吊顶高度一般情况下以2.3~2.5 m为 宜,以减少运行成本。
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构建动物细胞培养室和植物细胞培养实验室(二)
实验室內,还会有以下常用的基本设备。
I.仪器:
1)显微镜:倒置显微镜是组织细胞培养室所必需的日常工作常规使用设备之一,便于掌握细胞的生长情况并观察有无污染等。
2)培养箱:体外培养的细胞和体内细胞一样,需要在恒定的温度下生存,大多数情况下,适温度是 37'℃,温差变化一般不应**过±0.5'℃,细胞在温度升高 2^C时,持续数小时即不能耐受,40°℃ 以上捋很快。因此需要有能控制温度的培养箱,如具有较高灵敏度的恒温培养箱及CO₂培养箱。
3)干燥箱:川于细胞培养箱的有些器械、器皿需要烘干后才能使用,玻璃器皿等须干热消毒。干热消毒时,电热干燥箱升温较高,一般需达到 160°c 以上。通常使用鼓风式电热干燥箱。其优点是温度均匀、效果较好,缺点是升温过程较慢。升温时不能先升温后鼓风而应鼓风与升温同时开始,至 10(TC时,停止鼓风,应避免包裹器皿的纸或棉花烧焦,烧焦的碎屑可影响细胞的生长。消毒后,不能立即打开箱门以免骤冷而导致玻璃器皿损坏,应等候溫度自然下降至 100°c以下方可开门。
4)水纯化装置:细胞培养对水的质量要求较高,细胞培养以及与细胞培养工作相关的液体的配制用水事先严格纯化处理。水纯化时可采用离子交换装賈或蒸馏器。离子交换纯水尚不能有效去除**物,因此用水时尚需冉次蒸馏。进行细胞培养时配制各种培养液及试剂等均需使用三次蒸馏水:即使是用于玻璃器皿的冲洗,也应使用二次以上蒸馏水。
5)冰箱:细胞培养室配备。
普通冰箱或冷藏杞
储存培养液、生理盐水、Hank’s液试剂等培养用的物品及短期保存组织标本
低温冰箱(-20 °c)、温冰箱
用于储存需要冷冻保存生物活性及较长时期存放的制剂,如酶、血清等。
细胞培养室的冰箱应属,不得存放易挥发、易燃烧等对细胞有害的物质,且应保持清洁。
6)细胞冷冻储存器:储存器常用的是液氮界器。根据使用需要分为不同的类型及多种规格。选择购置液氮容器时要综合考虑容积大小,取放使用方便及液氮挥发量(经济)三种因素。液氮界器的大小可自25L~500L,可以储存1m1的安甑250~15000个左右液氮温度可低达-196℃,使用时应防止冻伤。由于液氮不断挥发,应注意观察存留液氮情況,及时定期补充液氮,避免挥发过多而致细胞受损。
7)离心机:进行细胞培养时,常规需要进行制备细胞悬液、调整细胞密度、洗涤、收集细胞等工作,通常需要使用离心机。
一般可常规配置 4000rpni 的国产台式离心机,例如细胞沉降,使用 80~100g的离心机即可,离心力过大有时可能引起细胞的损伤。
另外,可根据需要添置其他类型如大容显或可调节温度的离心机等。
若需用途,例如某些细胞的分离制备需梯度离心,则需另行配置实验所需的具备其他功能的离心机。
8)天平:常用的有扭力天平、精密天平及各种电子天平。
分析大下的感;W:为 0.1mg、0.01mg和10.001mg。根据称取物质的;W:和称精度的要求,选择适宜级别的天平。要求精密称定时,当取样量大于 100mg 选用感量为 0. 1mg 天平,在 100— 10mg选用感量为 0.01mg 天平,小于10mg选用感量为 0.001mg 天平。
9)消毒器:直接或间接与细胞接触的物品均需消毒灭菌处理。
10)滤器:目前细胞培养工作中采用的培养用液,包括人工合成培养液、血清、消化用胰酶等常含有维生素、蛋白、多肽、生长因子等物质,这些物质在商温或射线照射下易发生变性或失去功能,因而上述液体多朵用滤过沙毒以除去细胞。
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动物实验室建设的标准要求
动物实验作为生命科学研究的基础和重要支撑条件,越来越受到研究人员的重视,试验动物学的发展水平,一直用来评价生命科学和研究的水平。那动物实验建设又遵守那些相关标准与注意事项。下面,中净环球净化就为大家介绍动物实验室建设的标准要求与注意事项。
一、动物实验室建设的标准要求
1:做好整体设计,管线布局要统一规划,为工作人员营造舒服的公共环境,保证实验室的稳定发展。
2:根据室内风量大小,合理配置风井的位置、大小、数量,做好相关设计工作。
3:在实验室内要配置房间与房间之间的受控访问控制系统,缓冲间是必不可少的。
4:工作人员得到允许方能进入实验室内的重要房间;外来人员培训以后,得到允许方能进入实验室。
5:一定要做好有害废物的排放,需要合理配置废气、废水处理系统,并且做好废液回收系统、智能控制系统。
6:做好危险物品的储存工作。
7:做好相关知识产权的保护工作。
二、动物实验室建设的注意事项
1:要根据饲养动物的类别来建立相应的动物房、活动场所、用房与设施。建议这些用房的区域要安静、清洁,不受外界影响。
2:动物房室内温度为18-29度,相对湿度为40-70%,噪音为60分贝以内。要有良好的光线与通风,地面要整洁,且不积水。**面、墙面要易于清洁,外墙、屋顶、顶棚、门窗及通外面的管道等要杜绝外界动物、蚊蝇及其它虫害钻入。
3:笼子内饲养的动物要合理控制动物密度,且要有送排风、降温及保温设备。要设立动物的排污、排水设施,防止病原扩散。还要对饲养笼定期消毒,垫料(高温消毒)也要定期换。
动物实验室的设计原则就是要做到三保护:保护人、保护环境和保护实验动物。对于动物的保护不仅仅是出于人道的做法,也是为了有效的**实验数据的准确性。因此对于动物实验室检测数据的真实性至关重要。